2D Gelelektrophorese

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter, die vornehmlich molekularbiologisch tätig sind und ihr Methodenspektrum Richtung Proteinidentifizierung ausweiten möchten

Inhalte/Lernziele

Die zweidimensionale Gelelektrophorese ist durch ihr großes Auflösungsvermögen die Trenntechnik der Wahl zur quantitativen und qualitativen Analyse komplexer Proteingemische geworden. Geringfügige Veränderungen der Struktur und Ladung einzelner Proteine (Phosphorylierung, Glykosylierung, Aminosäureaustausch etc.) können durch Verschiebung der Position im 2D Muster identifiziert werden. Sie ermöglicht als einzige Analysemethode die schnelle, mikropräparative Reinigung von Proteinen aus komplexen Proteingemischen für die nachfolgende Charakterisierung und Identifizierung mit Hilfe hochsensitiver Methoden der Proteinbiochemie, z.B. Massenspektrometrie oder Protein-Sequenzierung. Die Teilnehmer werden eine 2D Gelelektrophorese mit immobilisierten pH Gradienten (IPG) durchführen. Der Kurs beinhaltet: Probenvorbereitung, Herstellung des Gradientengels, isoelektrische Fokussierung mit IPG, Transfer der ersten Dimension auf die zweite Dimension, SDS-Gelelektrophorese, Silber- und Coomassie-Färbung.

Themenschwerpunkte

2D Gelelektrophorese mit immobilisierten pH Gradienten (IPG), Auswertung der 2D Gele, Trouble Shooting