Klonierungsstrategien

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit Vorkenntnissen in molekularbiologischer Analytik

Inhalte/Lernziele

In diesem eineinhalbtägigen Seminar werden grundlegende Methoden zur Klonierung von DNA-Fragmenten intensiv behandelt:

• Klonierungsstrategie

Vektoren: Möglichkeiten und Auswahlkriterien (welche Vektoren gibt es für welche Anwendungen: Standardklonierungsvektoren, eukaryotische Expressionsvektoren, induzierbare Systeme etc.) Enzyme: Isochizomere, kompatible Enden, geeignete Standardenzyme, Fill-in und bluntend, Dephosphorylierung etc. Tricks und Kniffe bei schwierigen Klonierungen

• Anforderung an die DNA Qualität und Reinheit Gelaufreinigung von Fragmenten PCR-Fragmente
• Ligation: Stöchiometrie und Besprechung verschiedener Methoden
• Transformation: kompetente Bakterien, Herstellung und Effizienzkontrolle
• Selektion: Antibiotikaresistenzgen, Blau-Weiß-Selektion mittels ß-Galactosidasegen
• Analyse und Kontrolle der Ergebnisse & Trouble Shooting

Themenschwerpunkte

Strategien zur erfolgreichen und effizienten Klonierung und Vermehrung von DNA-Fragmenten

Empfohlene Aufbaukurse

Transfektion und Reportergenanalyse, Virale Transduktion von Zelllinien