Phagen-Display Technik

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie und Zellbiologie

Inhalte/Lernziele

Das Prinzip des Phagen Display beruht auf der Fusion von Peptiden, Proteinteilen (z.B. FabFragmente der Antikörper) oder kompletten Proteinen mit Phagenhüllproteinen. Die rekombinanten Bakteriophagen werden in vivo wieder assembliert und entweder ins Medium sezerniert oder durch Lyse freigesetzt. Aus großen, rekombinanten Phagen Display Bibliotheken, die oft Milliarden unterschiedlicher Moleküle präsentieren können, lassen sich geeignete Bindepartner für einen bestimmten Liganden identifizieren und isolieren. Anwendung findet diese Technik zum Beispiel bei der Aufklärung von Protein-Protein-Interaktionen und bei der Suche nach spezifischen Antikörpern für therapeutische, diagnostische oder molekularbiologische Anwendungen. In dem Kurs wird mit einer vorgefertigten Phagenbibliothek gearbeitet, aus der ein bestimmtes Peptid gewonnen werden soll. Hierzu werden Anreicherungsrunden (Panning Runden) durchgeführt und dabei die Technik des "Panning" erlernt. Die Phagen werden hierfür amplifiziert und durch Fällung gereinigt. Die Anreicherung bindender Phagen soll durch Titer-Bestimmung mit Plaques, photometrische Phagenbestimmung und Phagen-ELISA verfolgt werden.

Themenschwerpunkte

Phagenbibliothek, Panning, Phagentiter-Bestimmung mittels Plaques, Photometrische Phagenbestimmung, Phagen-ELISA, Trouble Shooting

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