Primärzellkultur Basiskurs

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit soliden Grundkenntnissen in Zellkultur, die ihr Wissen im Bereich Primärzellkultur erweitern möchten

Inhalte/Lernziele

Permanente Zelllinien haben seit der Etablierung von HeLa in den 60er Jahren die Zellkultur revolutioniert. Aufgrund deren Ursprung lassen sich die mit diesen Zelllinien gewonnenen Ergebnisse jedoch nur beschränkt auf das gesunde Gewebe/Organ übertragen. Im Gegensatz dazu werden mittels der Primärzellkulturtechnik aus unterschiedlichen Geweben Kulturen etabliert, die eine hohe biologische Relevanz aufweisen und daher zunehmend die Zelllinien als Modellsystem ablösen. Dieser Kurs vermittelt Ihnen die gängigsten Techniken zur Isolierung von primären Zellen aus humanem Gewebe. Dabei werden zwei Techniken exemplarisch vorgestellt: Explantattechnik, mechanisch/enzymatische Isolationstechnik. Wir zeigen Ihnen die kritischen Punkte einer Isolation, so dass Sie in Ihrem Labor erfolgreich Primärzellen aus verschiedenen Geweben isolieren können. Die häufigsten Probleme im Umgang mit Primärzellen entstehen durch die Routinemethoden wie Auftauen/Einfrieren und Passagieren. Solche Fehler führen dann schnell zu einer niedrigen Anheftungsrate und/oder zu einem verlangsamten Wachstum und damit zu einem schleppenden Kultivierungsprozess, an dessen Ende die Zellen meist bereits gestresst in ein Experiment übernommen werden. In diesem Kurs lernen Sie die kritischen Schritte kennen und verstehen und können damit Ihre Primärzellkultur unter optimalen Bedingungen maximal nutzen. Die Charakterisierung der Primärzellen aufgrund deren zelltyp-spezifischen Marker ist darüber hinaus einer der wichtigsten Faktoren für einen Rückschluss der Ergebnisse auf das ursprüngliche Gewebe. Wir versorgen Sie mit Tipps und Tricks, wie Sie und am besten wann Sie eine Charakterisierung der Kulturen durchführen u.v.a. wie Sie Kontaminationen mit Fremdzellen identifizieren.

Themenschwerpunkte

Isolierung und Charakterisierung von Primärzellen, Einfrieren, Auftauen und Subkultivieren von Primärzellkulturen