Protein- und Peptidanalytik mit MALDI-TOF MS

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter ohne und mit Kenntnissen in der Massenspektrometrie

Inhalte/Lernziele

Die Analyse eines Proteoms erfordert wegen der enormen Komplexität schnelle Methoden zur Proteinidentifizierung. Da viele Komponenten eines Proteoms nur in sehr geringen Mengen exprimiert werden, müssen diese Methoden zudem eine hohe Nachweisempfindlichkeit aufweisen. Die Entwicklung schonender Ionisierungstechniken und die Fortschritte bei der Genomsequenzierung erlauben nun den Einsatz automatisierbarer und hoch sensitiver massenspektrometrischer (MS) Techniken zur Identifizierung von Proteinen. Eine der verwendeten Techniken ist die MALDI TOF MS (matrix assisted laser desorption ionization, gekoppelt mit einem time of flight Massenanalysator). In diesem Seminar werden die Teilnehmer mit den Grundzügen von Massenspektrometrie vertraut gemacht. Anschließend werden die notwendigen Teilschritte einer Proteinidentifizierung mit MALDI-TOF bzw. MALDI TOF/TOF MS erläutert. Dieser theoretische Teil wird durch Demonstrationsversuche im Labor vertieft. Anschließend werden die Möglichkeiten, aber auch die Schwierigkeiten dieser Methode im Hinblick auf biologische Fragestellungen diskutiert.

Themenschwerpunkte

MALDI-TOF-MS von Biomolekülen, Peaks und was dahinter steckt, das ABC (und XYZ) der Peptidsequenzierung, Datenbanksuche zur Proteinidentifizierung