Real Time PCR

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit Grundkenntnissen in der Molekularbiologie

Inhalte/Lernziele

Der Real Time PCR Kurs vermittelt anhand zweier typischer Beispiele den Aufbau einer Real Time PCR: Nachweis und absolute Quantifizierung, relative Quantifizierung und Gen-Expressionsstudie. Im ersten Kursteil wiederholen wir grundlegende Kenntnisse über den biochemischen Aufbau und die Struktur von DNA und RNA sowie Aufbau und Komplexität von Genomen. Wir besprechen unterschiedliche DNA- und RNA-Präparationsmethoden und gehen insbesondere auf verschiedene Methoden der cDNA-Präparation ein. Im zweiten Teil des Kurses werden die theoretischen Grundlagen der Real Time PCR mit den unterschiedlichen Detektionsformaten und Geräteplattformen und deren Vor- und Nachteile erklärt. Primerdesign und die Auswahl der richtigen Detektionssonden sind hier ein zentrales Thema. Im letzten Kursteil werden wir zwei Experimente zur absoluten Quantifizierung sowie eine kleine Expressionsstudie entwerfen und durchführen. Die Ergebnisse werden mit einer aktuellen Software ausgewertet und interpretiert. Die Kursteilnehmer sind aufgefordert, eigene Fragestellungen in den Kurs einzubringen, um so an praxisrelevanten eigenen Themen zu arbeiten.

Themenschwerpunkte

DNA-Synthese, Aufbau einer Real Time PCR zur Quantifizierung und Analytik von Gen-Expressionsstudien