Klonierungsstrategien

Inhalte & Lernziele

Dieser Kurs erläutert Ihnen intensiv die grundlegenden Methoden zur Klonierung von DNA-Fragmenten.

Es werden folgende Methoden besprochen und angewandt:

• Strategien zur erfolgreichen und effizienten Klonierung
• Anforderungen an die Sequenz und die Vektoren
• Vektortypen: Möglichkeiten und Auswahl (Standard-Klonierungsvektoren, eukaryotische Expressionsvektoren, induzierbare Systeme)

• Enzyme: Isochizomere, kompatible Enden, geeignete Standardenzyme, fill-in und blunt end, Dephosphorilierung

• Restriktionsverdau, Modifikation und Präparation
• Ligation: Stöchiometrie and Diskussion verschiedener Methoden
• Transformation (kompetente Bakterien, Herstellung und Kontrolle der Effizienz)
• Klonanalyse, Miniprep und Maxiprep
• Selektion: Antibiotika-Resistenz, Blau-Weiß-Selektion mittels ß-Galactosidase
• DNA Qualitäts-Anforderungen und -Reinigung
• Restriktionskartierung
• Stop-Codon entfernen
• Tipps und Tricks für schwierige Klonierungen
• Klonierungsbeispiele

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit Vorkenntnissen in molekularbiologischer Analytik.

Dozent

Dr. Bettina Füssel hat in Köln Biologie studiert und promovierte 1996 an der Johann-Wolfgang-von-Goethe-Universität Frankfurt/Main auf dem Gebiet der Hirnforschung. Seit 1996 arbeitet sie am Deutschen Krebsforschungszentrum Heidelberg als wissenschaftliche Mitarbeiterin an unterschiedlichen Forschungsprojekten. Neben der Entwicklung von transgenen und ''knock-out'' Mausmodellen für verschiedene Krebserkrankungen arbeitet sie speziell an der Identifizierung von Genen, die an der Entstehung des Bronchialkarzinoms beteiligt sind.

Empfohlene Aufbaukurse

Transfektion und Reportergenanalyse, Virale Transduktion von Zelllinien