Multiplex PCR Labor-Kurs

Inhalte & Lernziele

Multiplex-PCR, die gleichzeitige PCR mit mehreren Primerpaaren in einer Reaktion, ist heute eine Standardmethode. Waren es früher Kosten- und Zeitersparnis, so wird Multiplex-PCR heute benutzt, um Kontrollexperimente in einem Ansatz unter identischen Bedingungen durchzuführen. Derartige Anwendungen sind bei der Analyse von Gen-Expressionsmustern (RT-qPCR) genauso wichtig wie beim Nachweis und der Quantifizierung von DNA in Untersuchungsproben (z.B. GVO-Nachweis). Dabei kommt dem optimalen Primer-Design und der richtigen Primer-Mischung eine bedeutende Rolle zu. Nach einer Wiederholung der allgemeinen PCR-Grundlagen und der template-Präparation beschäftigen Sie sich im Kurs intensiv mit dem Primer-Design sowie der Primer-Mischung und setzen dann das Erlernte in der Praxis ein.

Im theoretischen Teil werden unter anderem folgende Themen behandelt:

• Grundlagen der PCR
• Template-Präparationen und ihre Auswirkungen auf die Multiplex-PCR
• Primer- und Sonden-Design für die Multiplex-PCR mit freier Software
• Optimierung des Temperatur-Zeit-Profiles für die PCR
• Optimierung der Reaktionskomponenten
• Typischen Anwendungsbeispiele: Deletionsscreening, DNA fingerprint, Quantifizierung mit interner Kontrolle, Sonden für qPCR etc.
• Trouble shooting und Diskussion Ihrer Anwendungen

Der Praxisteil umfasst:

• Primer-Design für die Multiplex-PCR
• Variation der Reaktionskomponenten
• Aufbau einer Triplex-PCR aus mehreren Einzel-PCRs
• Optimierung einer 9plex-PCR

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit und ohne Vorkenntnisse in der PCR. Der Kurs ist für PCR Anfänger ebenso geeignet wie für Fortgeschrittene.

Dozent

Dr. Johannes Becker-Follmann studierte Biologie und Philosophie in Saarbrücken und Freiburg. Er promovierte am Institut für Humangenetik und Anthropologie über “Vergleichende Genkartierungen bei Mensch und Maus“. Nach Forschungsaufenthalten in Osaka/Japan, Freiburg und Berlin gründete er im Frühjahr 2000 das Institut für Polymorphismus und Mutationsanalytik Deutschland in Homburg/Saar, das sich hauptsächlich mit der Analyse von DNA verschiedener Spezies beschäftigt. Seit 2002 führt er Schwerpunktseminare und Workshops zu PCR-Themen durch.