Mutagenesetechniken

Inhalte & Lernziele

Unter in vitro Mutagenese (site-directed mutagenesis) oder auch Oligonukleotidmutagenese versteht man die Umwandlung einer oder mehrerer DNA-Nukleotide ohne phänotypische Selektion. Sie dient z.B. der Struktur- und Funktionsaufklärung, zur maßgeschneiderten Veränderung von Proteinen und zur Charakterisierung regulatorischer Regionen des Genoms. Hierbei dient ein synthetisches Oligonukleotid, das die gewünschte Mutation enthält, als Primer für die in vitro Neusynthese von DNA. Nach Anlagerung des Primers an den komplementären Strang der Matrizen-DNA erzeugt eine DNA-Polymerase eine Kopie, die sich nur in der Primersequenz von der Matrize unterscheidet.

In diesem Kurs lernen Sie die theoretischen und praktischen Grundlagen der gerichteten Mutagenese, die dazu verwendete PCR-Technologie und das notwendige Primerdesign kennen. Im trouble shooting wird auf mögliche Fehlerquellen und Problematiken bei der in vitro Mutagenese eingegangen.

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie und PCR.

Dozent

Dr. Uwe Köhler studierte in Gießen und Braunschweig Biologie. Im Anschluss forschte er für vier Jahre am Medical Research Council Laboratory of Molecular Biology an der University of Cambridge. Zur Zeit ist er Leiter der Abteilung Molekularbiologie bei der Eurofins Medigenomix in Martinsried. Schwerpunkte seiner Tätigkeit sind u.a. de novo Gensynthesen und in vitro Mutagenesen.

Dr. Matthias Pfeiffer baute nach dem Studium der Biologie in Marburg den ersten Gensyntheseservice in Zentraleuropa auf. Dieser beinhaltete de novo Synthese, Mutagenese und Klonierung von Genen aller Art. Seit 2007 ist er als Regionalleiter bei Eurofins MWG Operon verantwortlich für den Vertrieb von Oligonukleotiden, DNA-Sequenzierungen und molekularbiologischen Dienstleistungen.