PCR in der medizinischen Diagnostik und Gen-Diagnostik

Inhalte & Lernziele

In diesem Kurs bearbeiten Sie den Einsatz der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in der medizinischen Gen-Diagnostik an zwei konkreten Beispielen. Zuerst lernen Sie, wie das PCR-Design durchgeführt werden muss, um Pathogene mittels PCR aus Probenmaterial nachzuweisen. Dabei wird besonderes Wert auf die zuverlässige Bestimmung der Nachweisgrenze (limit of detection), wie sie für z.B. ISO17025 gefordert ist., gelegt Danach werden Sie anhand der Lactose-Intoleranz des Menschen den Aufbau einer PCR-basierten Genotypisierungsmethode durchführen. Im Kurs werden Sie dazu die DNA-Sequenzen aus Datenbanken suchen, das Primer-Design für diese Analyse durchführen, die Pipettierpläne erstellen und die PCR durchführen. Anschliessend vergleichen Sie die unterschiedlichen Möglichkeiten der Genotypisierung wie zum Beispiel: Sequenzierung, Minisequenzierung, real-time PCR, MLPA und RFLP-PCR. Zum Abschluss des Kurses werden Ihre Proben mittels Restriktions-Spaltung und Gelelektrophorese analysiert und der Genotyp bestimmt. Themen wie die Validierung Ihres PCR-Assays werden ebenso besprochen wie die Überprüfung Ihrer Daten bzgl. des Hardy-Weinberg-Gleichgewichtes.   

Im praktischen Teil wenden Sie im Experiment folgende Techniken an:

• PCR zur Bestimmung der Nachweisgrenze eines Pathogens
• DNA-Präparation aus Mundschleimhautabstrich
• Primer-Design und PCR
• Restriktionsspaltung und Gelelektrophorese

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter insbesondere aus medizinischen Laboratorien mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie und Zellbiologie.

Dozent

Dr. Johannes Becker-Follmann studierte Biologie und Philosophie in Saarbrücken und Freiburg. Er promovierte am Institut für Humangenetik und Anthropologie über “Vergleichende Genkartierungen bei Mensch und Maus“. Nach Forschungsaufenthalten in Osaka/Japan, Freiburg und Berlin gründete er im Frühjahr 2000 das Institut für Polymorphismus und Mutationsanalytik Deutschland in Homburg/Saar, das sich hauptsächlich mit der Analyse von DNA verschiedener Spezies beschäftigt. Seit 2002 führt er Schwerpunktseminare und Workshops zu PCR-Themen durch.