Programm
 
 

Real Time PCR Basiskurs

Inhalte & Lernziele

Die Real Time PCR hat sich als Standard-Methode für den Nachweis, die Quantifizierung und auch Genotypisierung von DNA/RNA etabliert. Neben den theoretischen Grundlagen der qPCR, dem Versuchsaufbau und der Auswertung der Daten, stehen drei Experimente modelhaft im Zentrum: die Bestimmung der Nachweis-und Quantifizierungsgrenze, die Genotypisierung mittels HRM und Sonden sowie die relative Quantifizierung in einer Expressionsstudie und ihre Auswertung.   

Im theoretischen Teil werden u.a. folgende Themen behandelt:

  •  Prinzip der Real Time PCR unter anderem unterschiedliche Detektionsformate und Geräteplattformen (Eva-Green, Sonden, Multikanal-Detektion mit/ohne ROX)
  • Interpretation und Daten-Auswertung: Ct-Werte, Threshold-Setting, Baseline, Schmelzkurve, Methoden der Effizienz-Bestimmung und Rechnen mit Delta CT
  • Genotypisierung mittels HRM und Sonden-Systemen (FRET)
  • Qualifizierung der RNA und cDNA, Primer-und Sonden-Design und Analyse der geeigneten endogenen Referenz und verschiedene Auswertemethoden
  • Trouble Shooting: Integrität der RNA/cDNA, Kontamination, Anzahl und Größe der Replikate

Der Praxisteil umfasst:

  • Nachweis und Quantifizierung von Legionellen mittels Standardkurve (LOD, LOQ)
  • Genotypisierung mittels HRM und Sonden-Systemen
  • Präparation von RNA, cDNA-Synthese, relative Quantifizierung
  • Verschiedene Auswertungsmethoden werden mit den Kursdaten demonstriert

Die Teilnehmer erhalten eine Schritt für Schritt Arbeitsanleitung (qPCR-Fibel) für die durchgeführten Experimente.

 

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiter/-innen mit Grundkenntnissen in der Molekularbiologie.

Dozent

Dr. Johannes Becker-Follmann studierte Biologie und Philosophie in Saarbrücken und Freiburg. Er promovierte am Institut für Humangenetik und Anthropologie in Freiburg über “Vergleichende Genkartierungen bei Mensch und Maus“. Nach Forschungsaufenthalten in Osaka/Japan, Freiburg und Berlin gründete er im Jahr 2000 das Institut für Polymorphismus und Mutationsanalytik in Saarbrücken, das sich hauptsächlich mit der Analyse von DNA verschiedener Spezies beschäftigt. Seit 2002 führt er Seminare und Workshops zu PCR-Themen durch.

 

 

Empfohlene Aufbaukurse

Real Time PCR Aufbaukurs: Genexpressionsanalyse, PCR- und Primer-Design, PCR und Real Time PCR: Trouble Shooting und neue Entwicklungen