Real Time PCR Labor-Kurs

Inhalte & Lernziele

Die real time PCR hat sich als Standard-Methode für den Nachweis und die Quantifizierung von DNA und RNA etabliert. Am ersten Tag erlernen Sie die Grundlagen der real time PCR. Dabei werden unter anderem unterschiedliche DNA- und RNA-Präparationsmethoden vorgestellt. Im praktischen Teil werden Sie mittels SYBRGreen und einer Detektionssonde die Menge Legionellen in einer Probe bestimmen. Im zweiten Teil des Kurses werden die theoretischen Grundlagen der real time PCR mit den unterschiedlichen Detektionsformaten und Geräteplattformen und deren Vor- und Nachteile erklärt. Primer-Design und die Auswahl der richtigen Detektionssonden sind hier ein zentrales Thema. Im letzten Kursteil werden Experimente zur absoluten Quantifizierung besprochen und verschiedene Auswertemöglichkeiten demonstriert.

Im theoretischen Teil werden u.a. folgende Themen behandelt:

• Grundlagen des biochemischen Aufbaus und der Struktur von DNA und RNA
• Aufbau und Komplexität von Genomen
• Unterschiedliche Detektionsformate
• Verschiedene Geräteplattformen und deren Vor- und Nachteile
• Primerdesign und die Auswahl der Detektionssonden
• Trouble shooting und Diskussion Ihrer Anwendungen

Der Praxisteil umfasst:

• Nachweis und Quantifizierung von Legionellen mittels SYBR-Green
• Quantifizierung von Legionellen mittels Standardkurve und Detektionssonden
• Präparation von RNA und Synthese von cDNA
• Relative Quantifizierung in einer Genexpressionsstudie
• Analyse der Schmelzkurve
• Verschiedene Auswertungsmethoden

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit Grundkenntnissen in der Molekularbiologie. PCR Kenntnisse sind nicht erforderlich.

Dozent

Dr. Johannes Becker-Follmann studierte Biologie und Philosophie in Saarbrücken und Freiburg. Er promovierte am Institut für Humangenetik und Anthropologie über “Vergleichende Genkartierungen bei Mensch und Maus“. Nach Forschungsaufenthalten in Osaka/Japan, Freiburg und Berlin gründete er im Frühjahr 2000 das Institut für Polymorphismus und Mutationsanalytik Deutschland in Homburg/Saar, das sich hauptsächlich mit der Analyse von DNA verschiedener Spezies beschäftigt. Seit 2002 führt er Schwerpunktseminare und Workshops zu PCR-Themen durch.