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Proteinreinigungs- und Analysemethoden

Inhalte & Lernziele

Proteine fungieren als molekulare Werkzeuge bei allen grundlegenden zellulären Prozessen der Zelle. Die Extraktion einzelner Proteine aus zellulären, hochkomplexen Gemischen und deren nachfolgende Reinigung erfordert Kenntnisse über chemische Interaktionsmöglichkeiten von Proteinen untereinander oder mit anderen Zellbestandteilen, sowie ihrer Stabilisierung außerhalb des intakten zellulären Umfeldes. Ziel des Kurses ist die Vermittlung unterschiedlicher Techniken der Probenvorbereitung für Analysen, z.B. die Proteom-Analyse. Das Erlernen der verschiedenen Grundoperationen zur reproduzierbaren Aufreinigung von Proteinproben aus Körperflüssigkeiten, Zellkulturen, Bakterien, Hefen und Geweben mittels Affinitäts-, Ionenaustausch-, hydrophober Interaktions- und Gelpermeations-Chromatographie, sowie die strategisch günstige Kombination unterschiedlicher Reinigungsmodule ist ein weiterer Schwerpunkt des Kurses.

Themenschwerpunkte dieses Theoriekurses sind:

  • Chemische und physikalische Wechselwirkungen von Proteinen
  • Proteinextraktion und Aufarbeitung von Proteinproben aus verschiedenem Material
  • Analysemethoden von Proteinen und posttranslationalen Modifikationen
  • Depletion von abundanten Proteinen
  • Probenvorbereitung für die zweidimensionale Gelelektrophorese
  • Massenspektrometrie
  • Immunologische Analysetechniken (Western Blot, ELISA, Protein-Arrays)
  • Protein-Interaktionsstudien
  • Lebendzell-Fluoreszenz-Mikroskopie von Proteinen
  • Chromatographische Aufreinigung von Proteinfraktionen
  • Reinigungsstrategien für Proteine

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiter/-innen mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie und Zellbiologie.

Dozent

Dr. Gisela Lättig studierte Chemie mit Schwerpunkt Biochemie an der Carl-von-Ossietzky-Universität in Oldenburg. Von 1998 bis 2003 war sie Mitarbeiterin der Strukturbiologiearbeitsgruppe am Max-Delbrück-Centrum (MDC) in Berlin und beschäftigte sich mit der Expression, Reinigung und Analyse von Proteinen. Sie promovierte am MDC über die Einschleusung von Peptiden und Proteinen in lebende Zellen und arbeitete ab 2008 als Post-Doc an der Erforschung des Einflusses von antiproliferativ wirkenden Peptiden auf die Lokalisation von Proteinen der DNA-Replikations-Maschinerie. Seit 2009 untersucht sie den Einfluss von Proteinen bei Stress oder nach oxidativer Schädigung von Neuronen an der Charité in Berlin.

Empfohlene Aufbaukurse

Western Blot Labor-Kompaktkurs, Isoelektrische Fokussierung im Polyacrylamidgel, 2D-Gelelektrophorese Labor-Kurs, Protein- und Peptidanalytik mit MALDI-TOF MS und ESI-Quadrupol MS, Quantitative Massenspektrometrie in der ProteomanalytikELISA Basiskurs, ELISA Aufbaukurs, SDS-PAGE Basiskurs