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Western Blot Labor-Kompaktkurs

Inhalte & Lernziele

Einzelkomponenten eines komplexen Proteingemisches können durch Antikörper  spezifisch und hochempfindlich nachgewiesen werden. Bei der Trennung der Pro-teine mittels Polyacrylamid-Gelelektrophorese sind die Proteine jedoch in der Gelmatrix für die großen Antikörpermoleküle schwer zugänglich. Daher werden die Proteine aus dem Gel auf eine dünne Membran übertragen (Western Blot). Es entsteht eine Kopie des Proteinmusters auf der Membran und spezifische Antikörper können darauf ungehindert an gesuchte Proteine binden. Der Nachweis des zu detektierenden Proteins erfolgt durch eine Farbreaktion oder Chemilumineszenz-Reaktion. Dieser Kurs vermittelt Ihnen die Technik des Western Blots und zeigt Vor- und Nachteile der verschiedenen Arten des Immunoblottings sowie unterschiedlicher Detektionsverfahren auf.

Im theoretischen Teil werden folgende Themen behandelt:

  • Grundlagen der Proteinanalytik und der Blot-Technik
  • Proteinextraktion und quantitative Bestimmung
  • Protein-Separationsverfahren
  • Basiswissen über Antikörper
  • Verschiedene Detektionsverfahren für den Western Blot (ECL, AP, Phospho-Imager)
  • Trouble shooting

Der Praxisteil umfasst die vollständige Durchführung eines Western Blots:

  • Probenvorbereitung
  • SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese
  • Tank (Wet) und semidry blotting
  • Antigendetektion mittels Antikörpern und colorimetrischer Farbreaktion (alkalische Phosphatase)

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiter/-innen mit soliden Grundkenntnissen in der Molekularbiologie.

Dozent

Dr. Britt Lemke studierte nach einer Ausbildung zur Biologielaborantin in Potsdam Biologie. 2004 promovierte sie am Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in Berlin auf dem Gebiet der Hämatopoese. Im Anschluss arbeitete sie als Post-Doc in der neurochirurgischen Universitätsklinik Heidelberg über Proteomics, Angiogenese, Tumorgenese und Immuntherapie von Hirntumoren. Seit September 2008 ist sie bei der PromoCell Academy als Labormanagerin und Dozentin tätig.

Empfohlene Aufbaukurse

2D-Gelelektrophorese Labor-Kurs, ELISA Basiskurs, ELISA Aufbaukurs