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Transfektion und Reportergenanalyse

Inhalte & Lernziele

Der Begriff Transfektion umfasst zahlreiche Verfahren mit deren Hilfe Nukleinsäuren in eukaryotische Zellen eingeschleust werden. Um möglichst viele Zielzellen zu erreichen, müssen hierbei Zelltyp, Vektorsystem und Transfektionsmethode aufeinander abgestimmt werden. In der anschließenden Reportergenanalyse kann dann die Transfektionsrate bestimmt werden. In diesem Kurs bekommen Sie einen Überblick über die Vor- und Nachteile verschiedener Transfektionsverfahren, Vektorsysteme und Reportergene und lernen die richtige Auswahl zu treffen.

Im theoretischen Teil werden u.a. folgende Themen behandelt:

  • Transiente und stabile Transfektion im Vergleich
  • Überblick über Techniken und Vektorsysteme
  • Parameter zur Optimierung der Transfektions-Effizienz
  • Besonderheiten bei der Transfektion primärer Zellen bzw. Zelllinien
  • Überblick über Reportergene und Reportergen-Assays
  • Biochemische Grundlagen der Reportergen-Aktivität
  • Experimentelles Design und Wahl geeigneter Systeme

Der Praxisteil umfasst:

  • Transiente Transfektionen von primären Zellen und Zelllinien mit verschiedenen Reporter-Plasmiden
  • Bestimmung der Transfektionseffizienz mittels unterschiedlicher Reportergene und Durchführung von Reportergen-Assays für unterschiedliche Luciferasen und beta-Galaktosidase, Fluoreszenzmikroskopie für GFP
  • Analyse verschiedener Methoden zur Normalisierung von Reportergenexperimenten

Zielgruppe

Technische und wissenschaftliche Mitarbeiter/-innen mit Grundkenntnissen in der Zellkultur und Molekularbiologie.

Dozent

Priv.-Doz. Dr. Rüdiger Arnold studierte Biologie in Gießen und arbeitete danach als Postdoktorand am Max-Plank-Institut für Physiologie und Klinische Forschung in Bad Nauheim. Im Anschluss wechselte er ins Deutsche Krebsforschungszentrum und habilitierte an der Medizinischen Fakultät der Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg im Fach Immunologie. Dort beschäftigte er sich mit der Aktivierung, Differenzierung und Apoptose in Leukozyten und bei Lymphomen. Von 2011 bis 2015 leitete er das Schülerforschungslabor des Heidelberger Life-Science Lab am Deutschen Krebsforschungszentrum. Gegenwärtig ​lehrt er an der Universität Heidelberg und ist ​als Dozent ​bei biowissenschaftlichen Weiterbildungsprogrammen tätig. Des Weiteren verfügt er über eine langjährige Erfahrung als Dozent bei der Weiterbildung zur Fachqualifikation Tumorbiologie des DIW-MTA.

Empfohlene Aufbaukurse

Klonierungsstrategien, RNA Interferenz